1 合適的細(xì)胞培養(yǎng)基

　　合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長增殖的最重要的條件之一,培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。

　　2 優(yōu)質(zhì)血清

　　目前,大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清.血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中最重要的成分之一,含有細(xì)胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。

　　3 無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境

　　無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件.在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染,或者自身代謝物質(zhì)積累,可導(dǎo)致細(xì)胞中毒死亡.因此,在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),必須保持細(xì)胞生存環(huán)境無菌無毒,及時(shí)清除細(xì)胞代謝產(chǎn)物。

　　4 恒定的細(xì)胞生長溫度

　　維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度.不同種類的細(xì)胞對培養(yǎng)溫度要求也不同.人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞的正常代謝會受到影響,甚至死亡.培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強(qiáng),溫度上升不超過39℃時(shí),細(xì)胞代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時(shí),細(xì)胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時(shí),細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞死亡,個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),細(xì)胞全部死亡.相反,溫度不低于0℃時(shí),對細(xì)胞代謝雖有影響,但并無傷害作用;把細(xì)胞放入25-35℃時(shí),細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減慢;放在4℃數(shù)小時(shí)后,再回到37℃培養(yǎng),細(xì)胞仍能繼續(xù)生長.細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢.當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí),細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡.但是,如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油),可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長期保存。

　　5 合適的氣體環(huán)境

　　氣體是哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。